|
本方法适用保健食品中绞股蓝总皂苷的测定。
本方法绞股蓝总皂苷的最低检出量为8μg。 1. 方法提要 样品中的绞股蓝皂苷，经甲醇提取，大孔树脂及氧化铝柱分离净化后，在酸性条件下，与香草醛反应呈现紫红色化合物，与标准比较定量。 2. 仪器 （1）21型分光光度计。 （2）恒温水浴。 （3）微量注射器。 （4）层析柱：10mL注射器，带活塞的层析柱（1.5mm×15cm）。 3. 试剂 （1）甲醇（分析纯）。 （2）乙醚（分析纯）。 （3）乙醇（分析纯）。 （4）5%香草醛－冰醋酸溶液（冷藏）。 （5）高氯酸（分析纯）。 （6）5%香草醛冰醛酸溶液+高氯酸（2+8）混合液（临用前配制）。 （7）绞股蓝皂苷对照品（含量98%）。 （8）101大孔吸附树脂。 （9）中性氧化铝（柱层析用100~200目）。 （10）绞股蓝皂苷对照品溶液，准确称取绞股蓝皂苷对照品100mg，用甲醇溶解并定容至50mL，即每1mL含绞股蓝皂苷2.0mg。 4. 测定步骤 （1）样品处理： a. 绞股蓝皂苷提取原粉：准确称取0.02g样品，加甲醇溶解定容至10mL供检。 b. 绞股蓝提取浓汁：准确取样0.5g于水浴上蒸干，甲醇溶解定容至10mL供检。 c. 绞股蓝饮料：准确吸取样液20mL于小烧杯中，放置水浴上低温加热15min，赶去CO2后，倾入101大孔吸附树脂柱中（带活塞的0.5mm×15cm柱内装101大孔吸附树脂约5g），加热水40~50mL以1mL/min的流速过柱，用70%乙醇60mL以0.5mL/min流速淋洗色层柱，弃去开头2mL流出液，然后收集洗脱液，置60℃水浴上蒸干，用甲醇溶解残渣定容至2mL供检。 d. 绞股蓝速溶茶：准确称取样品1.00g加10mL水溶解后，按照4.(1)c. 项绞股蓝饮料处理方法倾入101大孔吸附树脂柱中进行操作即得。 e. 绞股蓝胶丸、软胶囊：准确称取胶丸内容物1.00g于50mL三角瓶中，加海砂0.5~1g，加甲醇10mL提取3~4次至溶剂无色为止，合并甲醇提取液置60℃水浴中挥干溶剂加水溶解残渣，转入分液漏斗中，加乙醚10mL提取3次，弃乙醚，分取水溶液过101大孔吸附树脂柱（装大孔吸附树脂于10mL注射器中约4cm高，上加1cm中性氧化铝），用水30mL洗柱，弃水液，用50%甲醇洗脱，收集洗脱液60mL。置60℃水浴上挥干，加甲醇溶解残渣并定溶至2mL供检。 f. 保健食品脱囊内容物或茶叶：准确称取研细的样品0.50g于三角瓶中，加甲醇30mL置60℃水浴中回流4h，过滤。残渣用少量甲醇洗2~3次，提取液回收甲醇，残渣加水20mL溶解，转入分液漏斗中，加乙醚20mL萃取2次合并醚液，加少量水提取一次，弃醚液。水液并入原样液中，水液定容至25mL。吸取2.5mL样品处理液过101大孔吸附树脂柱，按4.(1) e. 项操作方法进行，收集50%甲醇洗脱液约60~80mL于60℃水浴上挥干，加甲醇溶解残渣，并定溶至2mL供检。 （2）绞股蓝皂苷标准曲线的绘制：分别取标准溶液5、10、20、40、60、80、100μL于10mL具塞比色管中，（相当于标准品10、20、40、80、120、160、200mg）于60℃水浴中挥干溶剂，各加入1mL5%香草醛冰醋酸+高氯酸混合液（2+8），摇匀，密塞，置60℃水浴中加热15min，取出，流水冷却至室温。各加冰醋酸5mL混匀，在555nm处测定吸光度，绘制标准曲线。绞股蓝总皂苷浓度在1~200mg/mL之间与吸光度值呈直线关系。 回归方程y=0.0153+0.001654x, r=0.997 （3）样品测定：取样品处理液40~60μL于10mL具塞比色管中，同上述标准曲线绘制方法操作，测定吸光度。查标准曲线，计算含量。 5. 结果计算 式中 X——样品中皂苷含量（g/100g或g/100mL）； m1——样品管相当于皂苷的含量（μg）； m——样品的质量（g）； V1——样品稀释的总体积（mL）； V2——测定时取样液的体积（mL）。 6. 准确度与精密度：回收率为88.6%~100.2%，标准偏差为2.66%。 7. 注释 （1）绞股蓝为葫芦科绞股蓝属植物的全草，含绞股蓝皂苷，具有降血脂、抗疲劳、增强肌体免疫力等功效。 （2）新购进的大也吸附树脂应经丙酮、乙醇浸泡处理，大量蒸馏水冲洗，湿法装柱，最后用pH=10的氢氧化钠溶液过柱，用水洗至中性，柱子即可使用。 （3）样品溶液过柱前，应先做空白试验，即柱子洗脱溶剂置蒸馏器皿中将溶剂挥干，加显色剂1mL以试剂零管测定吸光度，如吸光度值偏高，应查找原因，再进行处理。 样品测定时，应以层析柱洗脱液作为空白调零，测定样品的吸光度值。 （4）层析柱可重复使用，久用的柱子吸附能力减弱，可用pH10氢氧化钠进行再生。 |
1、本网部分资讯为网上搜集转载，为网友学习交流之用，不做其它商业用途，且均尽最大努力标明作者和出处。对于本网刊载作品涉及版权等问题的，请作者第一时间与本网站联系，联系邮箱：tignet@vip.163.com 本网站核实确认后会尽快予以妥当处理。对于本网转载作品，并不意味着认同该作品的观点或真实性。如其他媒体、网站或个人转载使用，请与著作权人联系，并自负法律责任。
2、凡本网注明"来源：虎网"的所有作品，版权均属虎网所有，未经本网授权不得转载、链接、转贴或以其他方式使用；已经本网授权的，应在授权范围内使用，且必须注明"来源：虎网"。违反上述声明者，本网将追究其法律责任。
