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本方法适用于保健食品中甘草酸的测定。
本方法的最低检出量为50.0μg。 1. 方法提要 样品中的甘草酸用20%乙醇溶液提取，C18柱分离，高效液相色谱254nm波长测定，与对照品的保留时间比较定性，峰面积上标法定量。 2. 仪器Waters-2690高效液相色谱仪，996二极管阵列检测器。 （1）超声波提取器。 3. 试剂 所用试剂除特殊注明外均为分析纯；实验用水为去离子水或同等纯度蒸馏水。 （1）20%乙醇溶液：取无水乙醇20mL，加水80mL，混匀。 （2）冰醋酸。 （3）乙腈。 （4）甘草酸标准溶液：准确称取甘草酸对照器50.0mg，用20%乙醇溶液溶解并定容至50mL，混匀。此溶液每1mL含甘草酸1.0mg。 4. 测定步骤 （1）样品处理： a. 固体样品：准确称取固体样品2.0g左右，用20%乙醇溶液40mL超声提取20min，用20%乙醇溶液定容为50mL，过滤，滤液再经0.45μm滤膜过滤，备用。 b. 液体样品：准确吸取液体样品5mL，加20%乙醇溶液至40mL左右，超声波提取20min，用20%乙醇溶液定容50mL，过滤，滤液再经0.45μm滤膜过滤，备用。 （2）色谱分离条件： 色谱柱：C18柱4.6mm×200mm。 流动相：水+乙腈+冰醋酸=63+37+0.15。 流速：1.0mL/min。 测定波长：254nm。 进料量：10μL。 （3）标准曲线的绘制：准确吸取甘草酸标准溶液0.5、1.0、2.0、4.0、8.0mL置于10mL容量瓶中，用20%乙醇溶液稀释至刻度，混匀后分别取10μL标准溶液注入高效液相色谱仪，在下述条件进行测定，并绘制标准曲线。标准曲线溶液为0.05、0.10、0.20、0.40、0.60、0.80、1.0mg/mL。回归方程y-1015.43x－203.92，r=0.9997。 （4）样品测定：准确吸取样品处理液10μL注入高效液相色谱仪分离测定，以对照品峰的保留时间定性，以峰面积外标法定量。 甘草酸的标准曲线图见图2-52，甘草酸对照品色谱图见图2-53，样品（甘草酸精）色谱图见图2-54。 5. 结果计算 式中 X——样品中甘草酸含量（μg/g或μg/mL）； c——外标法得出的测定样品中甘草酸浓度（μg/mL）； m——分析样品的质量（g或mL）； V——样品测定液体积（mL）； 6. 准确度与精密度 不同样品不同浓度的加标回收率为85.3%~94.4%。重复10次，测定结果的RSD为8.6%。 7. 注释 （1）甘草酸（glucyrrhizic acid）是甘草含有三萜类物质。甘草酸的钾、钙盐为甘草的主要甜味成分，亦称甘草甜素或甘草苷，属酸性皂苷。 （2）甘草酸具有肾上腺激素作用，亦具有消炎、抑制病毒、促进脂质代谢作用。 （3）甘草酸易溶于热水、稀乙醇，不溶于无水乙醇或乙醚等。甘草酸在甘草中以钾盐或钙盐形式存在，其水溶液酸化后可析出皂苷，溶于丁醇或乙酸乙酯。 （4）当样品组分复杂、干扰因素多时，可采用以一方法提取样品：固体样品用1%氨水溶液浸泡萃取甘草酸，萃取液用3mol/L HCl调至pH2.0后，以丁醇+乙酸乙酯（3+7）萃取，除去水溶性杂质，再用1%氨水从丁醇+乙酸乙酯中反萃取甘草酸；提取液用醋酸调至pH中性后加无水乙醇使溶液为20%乙醇溶液供测定。液体样品则直接用3mol/L HCl调至pH2.0后，用丁醇+乙酸乙酯（3+7）溶液提取后按上述方法进行。 |
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