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本方法适用于大豆及其制品中大豆总皂苷的测定（在测定前样品需前处理）。
1. 方法提要 分光光度法测定大豆总皂苷含量的新方法，以齐墩果酸作为标准品，采用分光光度法，配合薄层分析结果测定了经大孔树脂吸附法、正丁醇再分配法和混合法精制纯化后的三种大豆总皂苷样品含量。 2. 仪器 （1）721分光光度仪：上海第三分析仪器厂。 （2）电热恒温水浴锅：北京长源实验设备厂。 3. 试剂 （1）齐墩果酸标准品（含量为99.999%）：中国药品生物制品检定所。 （2）人参皂苷标准品（含量为99.999%）：中国药品生物制品检定所。 （3）大豆皂苷Ⅰ标准品：日本静岗县立大学富田薰教授惠赠。 （4）CMC及硅胶G（薄层层析用）：青岛海洋化工集团生产。 （5）显色剂：氯仿+甲醇+水（65+35+10）混匀静置取上层。 （6）氯仿及甲醇（分析纯）：上海化工厂生产。 （7）98%浓硫酸：哈尔滨化工厂生产，稀释成10%溶液待用。 （8）高氯酸。 （9）冰醋酸。 （10）5%香草醛－冰醋酸溶液。 （11）齐墩果酸标准溶液：准确称取齐墩果酸标准品27.60mg，加甲醇溶解，定容至100mL，得浓度为0.276μg/μL的标准溶液。（标明小数点后2位由分析天平精度决定）。 4. 测定步骤 （1）样品处理： 样品1：为豆粕乙醇提取物经大孔树脂吸附法纯化的大豆总皂苷制得物，棕 黄色粉末。 样品2：为豆粕乙醇提取物经正丁醇再分配法纯化制得的大豆总皂苷提取 物，黄色粉末。 样品3：为将样品2按样品1的方法时一步纯化处理的大豆总皂苷制得物， 为浅黄色片状结晶。 准确称取样品1、样品2及样品3，分别为31.2、26.6、27.2mg，以甲醇溶解后分别定容于100mL容量瓶中，即得浓度分别为0.312、0.266、272μg/μL的样品溶液。 （2）标准曲线的绘制：准确吸取齐墩果酸标准溶液100、200、300、400、500、600μL于具塞试管中，70℃水浴上蒸干，于每个试管中加新配制的5%香草醛－冰醋酸溶液0.2mL、高氯酸0.8mL，置60℃水浴上加热15min，流水冷却，加冰醋酸5mL，摇匀，以分光光度计560nm波长处测量吸光度值A，绘制标准曲线图并将结果做统计分析得到回归方程。 （3）样品中大豆总皂苷含量的测定： a. 样品的薄层色谱分析：把提取的样品溶液，人参皂苷的90%醇提取物的甲醇溶液及剂墩果酸标准液点于CMC-硅胶G（0.3%）薄层板上，进行分析。展开剂CH3Cl3+CH3OH+H2O（65+35+10），显色剂：10%的硫酸溶液，110℃加热10min。 b. 大豆皂苷与剂墩果酸量比换算系数的推算： 样品的测定：吸取300μL样品1，样品2和样品3溶液，按4.(2)项下进行操作，测得A值，每个样品各取3份测定。 （4）精密度试验：连续测定剂墩果酸标准品溶液200μL，方法同上，共5次，得出相对标准差（RSD）。 （5）回收率试验：准确吸取样品1溶液200μL于3只具塞试管上，加入准确吸取的齐墩果酸标准溶液100μL，按4.(2)项下操作，测得在560nm波长处的吸光度A值；同时做样品1的300μL、400μL各3份，同上操作；计算回收率及相对标准偏差RSD。 5. 结果计算 （1）齐墩果酸标准曲线的测定结果见表2-4。 表2-4 齐墩果酸标准曲线的测定结果
回归方程：y=0.02073+0.00706x t＜0.05 相关系数 r=0.988 （2）样品中大豆皂苷含量的测定：样品的薄层色谱分析结果见图2-23。 （3）精密度试验结果RSD为3.34%。 据文献报道大豆总皂苷中按含量加权分析推测大豆皂苷的平均相对分子质量为1157.5与齐墩果酸相对分子质量456对比，二者理论上的量比系数为2.54，考虑到在提取过程中失糖和与前期研究中样品2的高压液相色谱测定结果的对比分析，所以将量比系数定为2.2是适宜的。故在薄层分析定性的基础上，大豆总皂苷含量的计算公式为： 大豆总皂苷含量（mg）=样品中齐墩果酸相当量（mg）×2.2 三种皂苷样品含量的测定结果见表2-5。 表2-5 样品中大豆皂苷的含量测定结果
（4）加样回收率结果见表2-6。 表2-6 加样回收率200μL
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