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1、原理
样品中的褪黑素经溶解、稀释、过滤后，使用具有紫外检测器（UV）的高效液相色谱仪检测，根据色谱峰的保留时间定性，外标法定量。 2、试剂 实验用水为去离子水。 2.1甲醇：色谱纯。 2.2无水乙醇：优级纯。 2.3三氟乙酸：优级纯。 2.4高效液相色谱流动相：甲醇：水：三氟乙酸＝45：55：0.05。 2.5褪黑素（Melatonin）标准品：Sigma公司产品。 2.6褪黑素标准溶液的配制 精确称量30mg褪黑素标准品于100ml容量瓶中，加入70％（V/V）乙醇溶液后定容至刻度。准确吸取2ml上述溶液于10ml容量瓶中，加入流动相（3.4）定容至刻度，此溶液浓度为0.0600mg/ml。 3、仪器设备 3.1高效液相色谱仪：附紫外检测器（UV）。 3.2超声波清洗器。 3.3离心机。 4、分析步骤 4.1样品处理：使用研钵将片剂或胶囊研成粉末并使之混合均匀。 4.2精确称量约一粒片剂或胶囊的重量于10ml容量瓶中，以70％（V/V）乙醇定容至刻度，使用超声波清洗器超声提取10min。将提取液离心至澄清。准确量取上清液2ml于10ml容量瓶中，以流动相定容至刻度，混匀后经0.45μm滤膜过滤后进行色谱分析。 4.3测定 4.3.1液相色谱参考条件 4.3.1.1色谱柱：μ－BondapakTMC18，4.6mm×250mm。 4.3.1.2紫外检测器：检测波长：222nm。 4.3.1.3流速：0.8ml/min 4.3.1.4柱温：室温 4.3.2色谱分析 量取10μL标准溶液及样品净化液注入高效液相色谱仪中，以保留时间定性，以试样峰高或峰面积与标准比较定量。 5、结果 5.1计算 按式（1）计算。 …………（1） 式中： X－样品中褪黑素的含量，mg/kg h－样品的峰高或峰面积； －标准的峰高或峰面积； C－褪黑素标准溶液的浓度，mg/ml； m－样品质量，g。 5.2精密度和精确度 对本方法进行精密度和准确度试验，方法的添加回收率在96.7％～102.3％之间，相对相差≤4％。 5.3检出限 方法的检出限为0.5ng；取样量为0.5g时，最低检出浓度为0.07mg/kg。 |
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