|
本方法适用于熊胆制品中熊去氧胆酸的测定。
本方法熊去氧胆酸的最低检出量为20ng。 1. 方法提要 熊胆制品中的熊去氧胆酸用流动相甲醇+0.03mol/L磷酸盐缓冲液（66+34）提取，以高效液相色谱法于205nm波长处测定，以保留时间定性、峰面积定量。 2. 仪器 （1）LC-4A高效液相色谱仪（Shimazdu，日本），C-RIB色谱处理机。 （2）检测器：SPD-2AS紫外检测器。 （3）离心机（3000r/min） （4）超声波清洗器。 （5）微孔过滤器（滤膜0.45μm）。 3. 试剂 （1）甲醇（色谱纯）。 （2）磷酸氢二钠（优级纯）。 （3）水（二次蒸馏水）。 （4）熊去氧胆酸标准品（中国药品生物制品检定所）。 （5）标准溶液：准确称量熊去氧胆酸10mg置于5mL容量瓶中，用上述流动相溶解、摇匀，配制成2mg/mL的标准溶液。 4. 测定步骤 （1）样品处理： a. 固体样品：准确称取粉末状样品20mg，置离心管中，准确加入流动相5mL，超声处理10min，离心（3000r/min, 10min），取上清液通过微孔滤膜（0.45μm）弃去初滤液，续滤液供测定样品含量用。 b. 液体样品：准确吸取一定量液体样品直接经微孔滤膜过滤后备用。 （2）色谱分离条件： 色谱柱：Shim-pack CLC-ODS, 6mm×150mm, 5μm。 流动相：甲醇+0.03mol/L磷酸盐缓冲液（66+34），Ph4.70~4.80。 流速：0.8mL/min。 柱温：40℃。 检测波长：205nm。 灵敏度：0.016AUFS。 进样量：10μL （3）样品测定：准确吸取样品处理液和标准液各10μL（或相同体积）注入高效液相色谱仪进行分离，以其标准溶液峰的保留时间定性，用其峰面积求出样液中被测物质的含量。 标准色谱图见图2-35，样品色谱图见图2-36。 5. 结果计算 式中 X——样品中熊去氧胆酸的含量（mg/100g或mg/100mL）； S1——样品峰面积； c——标准溶液浓度（mg/mL）； S2——标准溶液峰面积； V——样品定容体积（mL）； m——试样质量或体积（g或mL）。 6. 注释 （1）本法在熊去氧胆酸浓度为0.2~1.6mg/mL范围内呈直线关系，线性方程为：y=0.9823x－0.0101，r=0.9992。 （2）同一样品重复测定6次，其结果RSD=2.3%。 （3）样品中标准添加平均回收率为97.5%。 |
1、本网部分资讯为网上搜集转载，为网友学习交流之用，不做其它商业用途，且均尽最大努力标明作者和出处。对于本网刊载作品涉及版权等问题的，请作者第一时间与本网站联系，联系邮箱：tignet@vip.163.com 本网站核实确认后会尽快予以妥当处理。对于本网转载作品，并不意味着认同该作品的观点或真实性。如其他媒体、网站或个人转载使用，请与著作权人联系，并自负法律责任。
2、凡本网注明"来源：虎网"的所有作品，版权均属虎网所有，未经本网授权不得转载、链接、转贴或以其他方式使用；已经本网授权的，应在授权范围内使用，且必须注明"来源：虎网"。违反上述声明者，本网将追究其法律责任。
