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本方法适用于保健食品中洛伐它丁的测定。但分光光度法灵敏度和准确度较差。
分光光度法的最低检出量为40μg；薄层层析法最低检出量4.0μg；高效液相色谱法最低检出量0.4μg。 （一）分光光度法 1. 方法提要 样品中的洛伐它丁用一定浓度的乙醇溶液提取后，在254nm和246nm波长下测定其吸光度，以两波长吸光度之差从标准曲线上查得样品测定液中洛伐它丁质量，从而计算样品中的含量。 2. 仪器 （1）紫外分光光度计。 （2）超声波提取器。 3. 试剂 本方法所用试剂除特殊注明外，均为分析纯。所用水为去离子水或同等纯度蒸馏水。 （1）乙醇溶液（75%）；25mL水中加入无水乙醇75mL，混匀。 （2）甲醇。 （3）中性氧化铝预处理柱：临用前用10mL甲醇活化。 （4）标准储备液：准确称取洛伐它丁标准品10.0mg，置于50mL容量瓶中，加甲醇溶解，并稀释至刻度，混匀置冰箱中保存。此溶液每1mL含洛伐它丁200μg。 （5）标准使用液：准确吸取标准储备液5.0mL，置于25mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，混匀。此溶液每1mL含洛伐它丁40.0μg。 4. 测定步骤： （1）样品处理：准确称取混合均匀的样品1.0g左右于50mL容量瓶中，加25%乙醇溶液30mL左右，超声波提取30min，补加75%乙醇溶液至刻度，混匀后过滤，弃去初滤液，收集渡液。准确吸取滤液5.0mL，通过预先活化好的中性氧化铝小柱，用20mL甲醇洗脱，收集洗脱液测定，同时做空白实验。 （2）标准曲线的绘制：准确吸取标准溶液0、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0mL（相当于洛伐它丁0、40、80、160、240、320、400μg）分别置于10mL比色管中，加甲醇1.0mL混匀。以零管为参比，分别在254nm和246nm波长下测定各管吸光度，以254nm与246nm吸光度之差为纵坐标，标准浓度为横坐标，绘制标准曲线。 （3）样品测定：以空白试验液为参比，用1cm比色杯在254nm和246nm波长下测定吸光度，以254nm与246nm吸光度之差，从标准曲线上查得样品测定液中洛伐它丁质量，计算样品含量。 5. 结果计算 式中 X——样品洛伐它丁含量（μg/g）； m1——样品测定液中洛伐它丁质量（μg）； m——样品质量（g）。 （二）薄层层析法 1. 方法提要 样品中洛伐它丁用适当浓度乙醇提取后，硅胶G薄层层析，碘蒸气显色，与洛伐它丁标准的Rf比较定性，与标准系列的斑点大小、颜色深浅比较定量。 2. 仪器 （1）硅胶G板：10cm×20cm。 （2）层析缸：长×宽×高（20cm×15cm×30cm）。 （3）25μL微量注射器。 3. 试剂 本方法所用试剂除特殊注明外，均为分析纯；所用水为去离子水或同等纯度蒸馏水。 （1）乙醇溶液（75%）：25mL水中分加入无水乙醇75mL，混匀。 （2）标准溶液准确称取洛伐它丁标准品10.0mg，置于10mL此容量瓶中，加75%乙醇溶解，并稀释至刻度，混匀，置冰箱中保存。此溶液每1mL含洛伐它丁1.0mg。 （3）二氯甲烷。 （4）碘。 （5）展开剂：二氯甲烷+丙酮（4+1）。 4. 测定步骤 （1）样品处理：准确称取混合均匀的样品1.0g左右于25mL容量瓶中，加75%乙醇溶液10mL左右，超声波提取30min，被加75乙醇至刻度，混匀后过滤，弃去初滤液。收集滤液进行薄层分析。 （2）薄层分析：用微量注射器准确吸取样品溶液4.0μL，点状点于硅胶G板上，同时吸取标准溶液2.0、4.0、6.0μL与点有样品溶液的同一薄层板上分别进行点状点样，每点间隔1.5cm，挥干溶剂后，置于预先用展开剂饱和的盛有展开剂60mL左右的展开缸中，上行展开12cm，取出晾干，置碘蒸气中显色2min左右，在自然光下观察，以样品斑点与标准斑点Rf比较定性，样品斑点与标准系列斑点面积大小、颜色深浅比较定量。如不用薄层扫描定量，只用肉眼观察，则是半定量。 5. 结果计算 式中 X——样品洛伐它丁含量（μg/g）； m1——样品测定液相当于中洛伐它丁标准斑点的质量（μg）； V——样品提取液总体积（mL）； m——样品质量（g）； V1——点样体积（μL）； 1000——体积换算系数。 （三）高效液相色谱法 1. 方法提要 样品中洛伐它丁用适当浓度乙醇提取后，中性氧化铝柱净化，甲醇洗脱，液相色谱分离测定，与标准品保留时间比较定性，峰面积外标法定量。 2. 仪器 （1）高效液相色谱仪，配有紫外检测器，ODS色谱柱。 （2）超声波提取器。 （3）微量进样器。 3. 试剂 本方法所用试剂除特殊注明外，均为分析纯；所用水为去离子水或同等纯度蒸馏水。 （1）乙醇（75%）：25mL水中加入无水乙醇75mL，混匀。 （2）甲醇。 （3）中性氧化铝预处理柱：临用前用10mL甲醇活化。 （4）标准储备液：准确称取洛伐它丁标准品10.0mg，置于50mL容量瓶中，加甲醇溶解，并释释至刻度，混匀，置冰箱中保存。此溶液1mL含洛伐它丁200μg。 （5）标准使用液：准确吸取标准储备液5.0mL，置于25mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，混匀。此溶液每1mL含洛伐它丁40.0μg。 4. 测定步骤 （1）样品处理：准确称取混合均匀的样品2.0g左右，置于50mL容量瓶中，加75%乙醇溶液30mL，混匀，超声提取，补加75%乙醇溶液至刻度，混匀，过滤，弃去初滤液后，准确吸取滤液5.0mL，通过预先用甲醇活化过的中性氧化铝柱，用甲醇20mL洗脱，收集甲醇洗脱液备用。 （2）高效液相色谱参考条件： 色谱柱：ODS—120A（4.6mm×250mm）。 流动相：甲醇+水（75+25）。 检测波长：237nm。 流速：4.0mL/min。 进样量：10μL。 （3）标准曲线的绘制：准确吸取标准储备液适量，用甲醇分别配制成每1mL含洛伐它丁40、80、160、240、320、400μg的标准溶液，用微量注射器取10μL注入高效色谱仪测定，并绘制标准曲线。 （4）样品测定：用微量注射器取样品溶液10μL注入高效液相色谱仪中测定，以保留时间定性，峰面积外标法定量。
5. 结果计算 式中 X——样品中洛伐它丁的含量（μg/g）； m1——进样体积中洛伐它丁的质量（μg）； m——样品质量（g）； 2000——样品体积换算系数。 6. 准确度和精密度 本方法不同浓度的加标回收率均在80%~110%。10次测定结果的相对标准偏差均在5.0%~15.0%。 7. 注释 （1）洛伐它丁（Lovastatain）是以大米为原料，接种红曲霉，经培养后的代谢产物具有降血脂功能。其分子式为C24H36O5，相对分子质量为329.1。易溶于甲醇、乙醇、氯仿，不溶于石油醚。 （2）样品预处理时过中性氧化铝柱以除去色素和杂质。中性氧化铝柱可购买商品预处理柱，也可用5mL注射器装柱，每次用时必须用甲20~30mL活化。 |
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